In Vitro 組織モデルの基本原則

MatTek in vitro 器官型組織培養に基づくアッセイは、十分に裏づけされまた検証済みのプロトコルに準拠しています。このプロセスの基本的な概要は、例えばEpiDerm™Model EPI-200 Kit などを使用して進められます。

MatTek は、培養のすべてのベースとして正常な (形質変換されていない) 提供ヒト細胞を使用します。このような細胞は気液界面、すなわち ALI で標準細胞培養インサート上に培養されます(図を参照)。

図解 - 培養ウエル内の培養インサートにおいて、気液界面 (ALI) の組織を示しています。

この培養プロセスのある特定時期に、培養物表面から培養液をすべて取り除きます。そして、培養物には MatTek 独自の培養液に接触する基底外側面からのみ栄養を与えます。

上記に説明するプロセスは、お客様からの注文を受け取ってから開始され、培養する組織によって完了するまでに１～３週間かかります。

お客様には、このような組織培養インサートが２４個 (1キット、EPI-200) 届けられます。通常、ほとんどの組織は月曜日に発送され、米国内ならば火曜日、ヨーロッパであれば水曜日に届くことになります。海外発送は金曜日に行われるものもあり、この場合は翌週月曜日または火曜日に届くことになります。

写真に示されるように、６個入り培養ウエルプレートに EpiDerm (EPI-200) の入った６つの培養インサートがあります。３つの培養ウエルそれぞれにインサートが１つ、そしてプレートカバーの上に３つのインサートがあります。

テストのために、それぞれの培養液の表面で的確な量の当該サンプルまたは対照物質と接触させ、一方では基底外側面を通して培養液から組織に栄養を与えます (写真参照)。サンプルと対照は通常２組または３組ずつ作成します。

プロトコルにそって規定された期間の接触後、サンプルまたは対照物質を培養液から洗い流し、適正エンドポイントアッセイを実施します。

MatTek のプロトコルの多くが、外部要因に対応して組織の生存率を評価する数量的で便利な定量方法となる MTT ET-50 組織生存率アッセイ^１を使ってエンドポイントを測定することを規定しています。

組織構造、サイトカイン放出、および遺伝子調節の変化もモニターすることができます。しかしながら、このような補足的エンドポイントにより集められたデータは、MTT アッセイを使った組織生存率を測定する同一時期の陽性対照と陰性対照を含まない場合、疑いまたは誤解を招く恐れがよくあることに十分注意してください。

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1. MTT ET-50 組織生存率アッセイ - 黄色のテトラゾリウム成分 (MTT) を生存細胞のミトコンドリアによって不溶性の紫色ホルマザン生成物に還元する比色法システムです。数時間 MTT 試薬と細胞をインキュベートした後、溶液を加えて細胞を溶解し着色結晶を可溶化します。サンプルは ELISA プレートリーダーを使って 570 nm の波長にてその吸光度を読み取ります。発色量は直接生存細胞数に比例します。 ET-50 は組織生存率を 50% に低下させるために必要な時間を示します。